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第九十三期 單抗下游純化及分析整體解決方案

2017年04月24日來源:管理員
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一、單抗的概念

一種抗體分子是由一個(gè)B 淋巴細(xì)胞分化增殖而形成的漿細(xì)胞系產(chǎn)生的。由一個(gè)細(xì)胞增殖而形成的具有相同遺傳特征的細(xì)胞群叫做“克隆”。由一個(gè)漿細(xì)胞大量增殖形成的克隆產(chǎn)生的抗體稱單克隆抗體(Monoclonal antibody,McAb),簡(jiǎn)稱單抗。這種抗體分子組成均勻,特異性單一。用雜交瘤技術(shù)制備出來的單克隆抗體純度高、專一性強(qiáng)、效價(jià)高。


二、層析工藝的確定

各種模式中,Protein A親和層析法可獲得高純度的單抗,因此普遍用于初始純化步驟(即初期捕獲)中。離子交換層析法 ( IEC ) 的高載量特點(diǎn)也使之在抗體的制備純化中被廣泛采用。疏水相互作用層析法 ( HIC ) 具有去除抗體多聚體以及脫落的蛋白 A 配體等雜質(zhì)的性能。混合模式層析法(MXC,含羥基磷灰石類分離介質(zhì))也被運(yùn)用到了抗體的層析純化工藝之中。


三、層析填料的選擇

聚合物基質(zhì)具有一定的疏水性,非特異性吸附低,回收率高;剛性好,高流速下柱床體積穩(wěn)定,易于工業(yè)放大使用。

分離模式

特長(zhǎng)及用途

層析填料

親和層析(AFC

專為單克隆抗體的分離純化而設(shè)計(jì)的親和層析填料,是目前比較主流的用于捕獲階段的層析模式。

推薦型號(hào):

TOSOH聚合物基質(zhì):

Toyopearl AF-rProtein A -650F,

Toyopearl AF-rProtein A HC-650F

參考型號(hào):

GE瓊脂糖基質(zhì):

rProtein A Sepharose FF,nProtein A Sepharose 4FF

MabSelectMabSelect SuRe

離子交換(IEC

去除抗體中的多聚體,以及一般蛋白、血漿蛋白、病毒、疫苗等生物大分子樣品的分離純化。

陽離子交換

推薦型號(hào):

TOSOH聚合物基質(zhì):

Toyopearl GigaCap S-650M,Toyopearl MX-Trp-650M

參考型號(hào):

GE瓊脂糖基質(zhì):Capto S

陰離子交換

推薦型號(hào):

TOSOH聚合物基質(zhì):

Toyopearl GigaCap Q-650M,Toyopearl NH2-750F

參考型號(hào):

GE瓊脂糖基質(zhì):Capto Q,Capto adhere

疏水相互作用(HIC

去除抗體中的多聚體

推薦型號(hào):

TOSOH聚合物基質(zhì):

Toyopearl PPG-600M,Butyl-600M,Phenyl-600M

參考型號(hào):

GE瓊脂糖基質(zhì):Phenyl Sepharose 4FF


四、層析設(shè)備的選擇

選用Contichrom層析系統(tǒng),可運(yùn)行多種層析模式,如標(biāo)準(zhǔn)批處理過程、Capture SMB、MCSGP(多柱逆流溶劑梯度純化)、N-Rich等,可使層析填料、緩沖液等成本投入大為節(jié)省,同時(shí)也使得純化周期大為縮短。

Capture SMB應(yīng)用于Protein A捕獲環(huán)節(jié),采用連續(xù)上樣,可保證填料利用率最高,填料用量節(jié)省50%,從而使得成本投入大為縮減。

MCSGP
工藝應(yīng)用于去除降解物和聚合體的精純環(huán)節(jié),可將含有不純組分的產(chǎn)品回收在一個(gè)封閉的環(huán)內(nèi),進(jìn)行循環(huán)式的層析操作,從而最大限度地提取純產(chǎn)品,使得收率和純度二者兼得。

Contichrom系列產(chǎn)品線齊全,具有可滿足高壓制備的規(guī)格,最高系統(tǒng)耐壓為100 bar10 MPa),也具有為工業(yè)層析分離設(shè)計(jì)的產(chǎn)品,實(shí)現(xiàn)工藝的有效線性放大。

五、單抗HPLC分析中色譜柱的選擇

分離模式

分離原理

特長(zhǎng)及用途

推薦色譜柱

尺寸排阻(SEC

分子的空間尺寸

單抗分子量通常在150kDa左右。適用于抗體的單體與多聚體(二聚體以上)的分離,或者單體與抗體降解產(chǎn)物的分離。有時(shí)也可將2根色譜柱串聯(lián)使用。

TSKgel SuperSW mAb HTP

TSKgel SuperSW mAb HR

TSKgel UltraSW Aggregate

TSKgel G3000SWXL

TSKgel SuperSW3000

離子交換(IEC

分子的離子性

抗體純化產(chǎn)物中,即使是分子量相同的組分也可能存在電荷異構(gòu)體(脫酰胺化、末端氨基酸突變)和糖鏈構(gòu)造異構(gòu)體等雜質(zhì)。此類色譜柱采用了非多孔類填料,可以獲得高分辨率、快速的分析。

TSKgel CM-STAT

TSKgel SP-STAT

TSKgel Q-STAT

疏水相互作用(HIC

分子的表面疏水性

在抗體藥物中,對(duì)于一些由于等電點(diǎn)相同而無法通過離子交換色譜法實(shí)現(xiàn)分離的、但表面疏水性有差異的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體、二聚體和多聚體等,可以考慮使用HIC實(shí)現(xiàn)分離。

TSKgel Butyl-NPR

TSKgel Phenyl-5PW

反相(RPC

分子的疏水性

適用于分析還原后的抗體重鏈輕鏈以及其他的降解產(chǎn)物。

TSKgel Protein C4-300

親水相互作用(HILIC

分子的親水性

適用于分析結(jié)合在抗體上的糖鏈的結(jié)構(gòu)差異性。

TSKgel Amide-80

TSKgel NH2-100


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