抗體藥物的開發(fā)是目前全球生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的熱點，在生物制藥領(lǐng)域占有極其重要的地位，被認為是目前生物醫(yī)藥研發(fā)的主流方向之一。目前在世界銷售額前10位的生物藥物中，抗體藥物就占了4個。
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單抗藥物由于具有靶向性強、半衰期長、副作用小等優(yōu)點，在治療重大疾病方面受到重視。單克隆抗體是一種生物大分子，由多個氨基酸組成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在細胞培養(yǎng)、純化、儲存過程中易發(fā)生化學(xué)修飾如糖基化、磷酸化、化學(xué)降解等，所以需要多種方法進行檢測分析。
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高效液相色譜法（HPLC）可以對抗體藥物以及重組蛋白等蛋白藥物的不均一性進行有效的分析。多種色譜分析方法的有效組合，能夠更好地進行蛋白藥物的定量和定性分析。例如，分子尺寸排阻色譜法（SEC）可以利用分子尺寸的不同，對多聚體、片段、PEG化蛋白等樣品進行有效的分析；離子交換色譜法（IEC）、疏水作用色譜法（HIC）、反相色譜法（RPC）、正相色譜法（NPC/HILIC）可以對帶電異構(gòu)體、構(gòu)造異構(gòu)體、糖基化、脫酰胺化及氧化等變化引起的雜質(zhì)進行高分辨率、高效分析。分離選擇性取決于色譜分離模式、色譜柱的種類和色譜條件等。
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以下對抗體藥物異構(gòu)體的HPLC分析，進行簡單的介紹。抗體藥物的高效液相色譜分析的分離模式，主要有以下幾種：
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一、尺寸排阻色譜法（SEC）--根據(jù)分子尺寸的不同，對多聚體、分解片斷進行分析
常用的柱子是TSKgel G3000SWXL。TSKgel SW 型色譜柱屬于硅膠基質(zhì)色譜柱，鍵合了親水性二醇基官能團以保護硅膠表面不與蛋白樣品相互作用。與其他競爭產(chǎn)品比較，SW型色譜柱單位柱體積的孔隙容量更大，能產(chǎn)生更高的分子量選擇性范圍和更高的分辨率。低吸附作用和均勻的孔徑分布能實現(xiàn)蛋白質(zhì)的高效分離。
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